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色譜柱常見問題問題指南及維護方法

日期:2024-08-22 19:24
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摘要:色譜柱常見問題問題指南及維護方法 1、色譜柱污染 色譜柱污染會引起保留時間漂移。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器,它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可能是:流動相本身,流動相容器,連接管、泵、進樣器和儀器密封墊,以及樣品等。 樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分,就可能使保留時間漂移。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量,在此情況下,保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加??梢酝ㄟ^使用固相提取等樣品前處理方法來去除樣品基質(zhì)的影響。 避免色譜柱污染*簡單的方法是防患于未然。相比...
色譜柱常見問題問題指南及維護方法
1、色譜柱污染
    色譜柱污染會引起保留時間漂移。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器,它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可能是:流動相本身,流動相容器,連接管、泵、進樣器和儀器密封墊,以及樣品等。
樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分,就可能使保留時間漂移。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量,在此情況下,保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加??梢酝ㄟ^使用固相提取等樣品前處理方法來去除樣品基質(zhì)的影響。
避免色譜柱污染*簡單的方法是防患于未然。相比之下,找到問題的所在并設(shè)計有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑,但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。
使用保護柱是個非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法。

2、色譜柱平衡
    如果我們觀察到保留時間漂移,首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。通常平衡需要10~20個柱體積的流動相。但如果在流動相中加入少量添加劑則需要相當(dāng)長的時間來平衡色譜柱。需要柱子的充分平衡,然后才能對HPLC進行檢定。

3、流動相有機溶劑
HPLC分析總要求使用HPLC純的試劑,關(guān)鍵是兩點:純度高、紫外吸收小。純度高,是希望沒有雜質(zhì)干擾HPLC分析;不會有金屬離子損害純度為99.99%以上的高純度硅膠基質(zhì)??梢酝ㄟ^重蒸分析純?nèi)軇?;或濾膜過濾,并定期把前置的過濾頭取下,放稀硝酸里清洗,再用純水洗至中性。
流動相有機溶劑可能影響HPLC的檢測限。http://www.ba17.com/LC-Column/Category380.aspx
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